RNA结合蛋白(RBP)与其RNA靶点动态相互作用,在转录、剪接、修饰、定位、翻译和降解等各个方面调节RNA的命运。RBP本身或其与RNA的结合出现功能障碍,可能导致各种缺陷甚至疾病。有效捕捉RBP-RNA相互作用,特别是动态甚至瞬时相互作用的方法,对于更好地理解RBP及其对RNA靶点的功能作用至关重要。
但目前仍缺乏有效方法来捕获RBP与其RNA靶点之间的稳定和瞬时相互作用,特别是当相互作用是动态的,或是样本量有限时。
2024年1月10日,芝加哥大学何川教授团队在 Nature Methods 期刊发表了题为:Profiling of RNA-binding protein binding sites by in situ reverse transcription-based sequencing 的研究论文。
该研究开发了一种基于逆转录酶的RBP结合位点测序方法——ARTR-seq,该方法依赖于抗体引导下的RBP结合RNA的原位逆转录来识别RBP结合位点。ARTR-seq避免了紫外交联和免疫沉淀,从而能够从20个细胞或一个组织切片中高效和特异地识别RBP结合位点。利用快速甲醛固定,ARTR-seq可以在短时间内(10分钟)捕获RBP的动态RNA结合。